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miR-148a-3p 靶基因筛选及验证 |
罗艳红,张 珊,彭小宁 |
湖南师范大学医学院 |
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Screening and verification of miR-148a-3p target gene |
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摘要 目的:筛选及验证 miR-18a-3p 的靶基因,为深入研究 miR-18a 的功能建立基础。方法:我们通过miRanda、Target Scan 和 PicTar 等多种生物信息学方法对 mir-18a-3p 的靶基因进行了预测分析,取共同交集的靶基因;运用生物素标记的 RNA 进行 RNA-RNA pull down 来验证优选得到的靶基因;构建过表达 miR-18a-3p 及干扰 miR-18a-3p 表达的稳定神经胶质瘤细胞株,用荧光定量 PCR 实验比较神经胶质瘤与正常胶质细胞中靶基因的表达水平及比较过表达和干扰表达与神经胶质瘤细胞株中靶基因的表达水平。结果:多种生物信息学网站预测 gadd5a 为其共同交集的靶基因之一;qRT-PCR 结果表明神经胶质瘤中 gadd5a 的表达较正常胶质细胞低, miR-18a mimics 及 miR-18a inhibit 转染入神经胶质瘤细胞系后,过表达 miR-18a 的神经胶质瘤细胞中 gadd5a 较未转染的表达低;RNA pull down 结果则表明GADD5a 是miR-18a-3p 的靶基因。结论:GADD5A 是神经胶质瘤中mir-18a-3p 的靶基因之一,mir-18-3p 可能通过调控靶基因gadd5a 的表达,促进神经胶质瘤细胞的迁移与侵袭。
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关键词 :
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基金资助: 国家自然科学基金项目(81472860) |
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